MLPA – Amplificazione legatura-dipendente multipla della sonda

Panoramica

Refertazione e risultati

La MLPA può dar luogo a due risultati:

• Positivo (patogeno o probabilmente patogeno): Un risultato positivo indica che è stata rilevata una delezione/duplicazione associabile al fenotipo della malattia in questione. In questo caso si offrirà una consulenza genetica o un orientamento personale relativo a possibili terapie mediche, progressione della malattia, strategie riproduttive e preventive e possibili implicazioni per altri
• Negativo: Un risultato negativo indica che il test non ha rilevato alcuna delezione/duplicazione. Ciò non garantisce che l’individuo soggetto ad esame godrà di buona salute o sarà libero da altri disturbi genetici o clinici. Un risultato negativo, inoltre, non esclude l’esistenza di una causa genetica soggiacente né elimina il rischio per la progenie futura. Ciononostante, se il test è negativo e la presenza della variante in questione è già stata accertata nel corredo genetico dei familiari affetti, sarà possibile escludere diagnosi di quello specifico disturbo genetico nel probando. Un risultato negativo può essere spiegato da una serie di fattori, incluse la scarsa conoscenza del corredo genetico e limitazioni associate alla metodologia impiegata

Requisiti a livello di campione

• I test genetici Igenomix possono essere eseguiti a partire dai campioni elencati più in basso.
• Si consiglia di etichettare accuratamente le provette e di impiegare dati identificativi unici. L’etichettatura erronea potrà comportare lo scarto del campione. Le informazioni minime necessarie all’accettazione del campione sono le seguenti: nome completo del paziente, data di nascita, sesso e numero di cartella clinica.

Per la diagnosi prenatale:

• Si consiglia vivamente di contattare il laboratorio con ampio margine di tempo al fine di poter programmare adeguatamente i lavori, fissando i termini di analisi prenatali e preparandosi ad eventuali inconvenienti.
• I campioni di prodotti del concepimento, villi coriali e liquido amniotico andranno corredati da un campione di sangue materno.
• Verrà data precedenza a tutti i campioni prenatali.

Il modulo per il “consenso informato” e quello di “richiesta del test” inclusi nel kit in dotazione, una volta debitamente compilati e firmati del paziente, andranno spediti assieme ai campioni all’interno della scatola oppure inviati per email al laboratorio. Igenomix vi invierà tutti i documenti necessari al prelievo e trasporto del kit fino al nostro laboratorio.

Metodologia

Limitazioni

La MLPA non può rilevare

• Riarrangiamenti cromosomici bilanciati.
• Delezioni e duplicazioni telomeriche.
• Delezioni e duplicazioni all’infuori della portata delle sonde da MLPA impiegate.
• Mutazioni puntiformi, piccoli inserimenti e delezioni.
• Ripetizioni o mutazioni della sequenza nel DNA mitocondriale.
• La specificità e sensibilità analitica della MLPA sono pari al 99%.

Falsi positivi o falsi negativi eventualmente ottenuti sono attribuibili alla presenza di rare varianti nella sequenza delle regioni studiate dalle sonde MLPA.  Mutazioni puntiformi o polimorfismi rilevati da una sonda all’interno di una sequenza riducono l’efficacia di legatura della sonda stessa. Ciò, in aggiunta, può portare a una riduzione della superficie relativa del picco. Le delezioni di un singolo esone rilevate dalla MLPA, pertanto, andranno sempre confermate da altri metodi di analisi (PCR multipla o sequenziamento, ad esempio).